圓二色光譜(簡稱CD)是應用最為廣泛的測定蛋白質二級結構的方法,是研究稀溶液中蛋白質構象的一種快速、簡單、較準確的方法。它可以在溶液狀態下測定,較接近其生理狀態。而且測定方法快速簡便,對構象變化靈敏,所以它是目前研究蛋白質二級結構的主要手段之一,并已廣泛應用于蛋白質的構象研究中,也可用來測定核酸和多糖的立體結構。
液體CD和固體CD
1,液體CD請務必逐個備注樣品成分及寄樣濃度,同時需備注下用什么溶液稀釋;固體CD需備注樣品成分。
2,如需解析二級結構,需要知道氨基酸數目和分子量,可以提供數據分析服務
液體CD
1,測試時需要空白溶劑做對照扣背景,麻煩樣品及溶劑至少各備5ml;
2,樣品及溶劑的濃度對測試影響較大,不宜過高或過低(濃度過高,會超電壓,數據不準;濃度過低,沒有信號):不同物質,濃度不同,測試時不對濃度進行摸索
a.如之前測過CD或有相關文獻,建議按對應濃度準備;b.如沒測過CD或無文獻,但掃過紫外全譜,建議優選紫外濃度的一半配制樣品,如不合適再調整(直接用紫外對應濃度,測CD的話濃度偏高);c.如以上均無,建議按0.5mg/ml來配(蛋白質樣品,濃度一般0.1-0.5mg/ml),但無法保證該濃度合適
3,測試結果一般提供原始數據,若需擬合后百分比數據請下單前告知;
4,每個樣品默認測一次,若需平行則按照多個樣品收費。
固體CD
1,將樣品和溴化鉀(光譜純度)1:150混合后研磨盡可能細致;
2,光譜純溴化鉀研磨細致作為空白對照。注:溴化鉀吸潮,樣品郵寄前密封好一些。
3,樣品量(至少):150-200 mg/樣, 是粉末樣品。
4.如果樣品透過率不好,建議采用積分球模式。
當用壓片法或石蠟油研磨法進行固體粉末樣品測試時,要盡可能地研磨獲得細小均勻的樣品顆粒。采用石蠟油糊方法時,必須注意某些憎水有機化合物可能溶于石蠟油中,這時所得CD光譜在某種意義上應視為溶液CD光譜。采用壓片法測試固體CD時,在保證手性樣品的定性濃度達到CD光譜儀檢測要求的同時,片越薄越透明越好(但切忌破損)。在某些情況下,壓片法不適用于手性抗衡陰離子存在下的固體誘導CD光譜的測定
